新一代免洗光激化學發光技術-多重發光氧通道免疫檢測（Multi-LOCI）
光激化(hua)學發(fa)光技術——一種新型的第四代化學發光技術，由于其是一種均相的反應平臺，在檢測過程中無需分離系統，具有免洗、背景低，靈敏度高，重復性好且操作簡單耗時短的優點，已經受到越來越多IVD企業的關注。光(guang)激化學發光(guang)技術又稱發光(guang)氧通道(dao)免(mian)疫(yi)分析（Luminescent oxygen channeling immunoassay, LOCI）技術，在1994由Ullman EF等人提(ti)出，后由(you)德(de)靈診斷開發為商業化產品 [具體原理介紹可見上一篇推送：]。近年來，LOCI技術市場規模保持快速增長，但是占整個化學發光市場比例很小，增長空間巨大。光激化學發光的技術壁壘較高，目前涉足的企業很少。
LOCI原理示意圖[1]
多重發光氧通(tong)道免疫檢測（Multi-LOCI）
Multi-LOCI原理如下圖所示，與AlphaLISA類似，當加入目標分析物后，multi-LOCI微球上的捕獲抗體將會和待測分子以及檢測抗體形成免疫夾心復合物，之后偶聯鏈霉親和素的供體微球（DB-SA）通過鏈霉親和素和生物素的特異性結合作用被標記在微球上。使用680 nm激光激發出ABs波長為615 nm的檢測熒光信號，即LOCI信號。通過統計熒光圖像中微球上的雙色熒光信號，以判斷檢測目標物分子的種類和濃度。進而通過編碼微球的熒光信號定位微球的LOCI檢測信號，建立標準曲線定量檢測待測目標物。與Luminex公司的xMAP編碼微球技術相比，multi-LOCI不僅僅具有多重的檢測能力，同時其反應操作步驟簡單，只需兩步反應，無需進行繁瑣的反復洗滌，便可實現快速、準確、多重的檢測。
Multi-LOCI原理示意圖[4]
下表對比了LOCI、multi-LOCI、Luminex技術現狀。
多重發光氧通道免疫檢測的應用
我們評估了multi-LOCI技術在檢(jian)測(ce)(ce)PCT標準(zhun)品的檢(jian)測(ce)(ce)性(xing)(xing)能，以及PCT臨(lin)床樣本的檢(jian)測(ce)(ce)性(xing)(xing)能，同時評估了PCT/IL-6聯檢(jian)（IP組(zu)合(he)）的性(xing)(xing)能。
PCT單指標的檢測性能
PCT指標重組抗(kang)原標準(zhun)曲(qu)線以(yi)(yi)及臨床樣本(ben)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)性能的數據，可以(yi)(yi)看到multi-LOI技術檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)靈敏度高，PCT指標標曲(qu)計算(suan)的得到的檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)限為6.39 pg/mL，檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)線性范圍(wei)約5個(ge)數量級。使(shi)用9例(li)血清樣本(ben)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)PCT項目，結果(guo)顯示multi-LOCI技術可以(yi)(yi)準(zhun)確定量臨床樣本(ben)，與(yu)羅氏cobas電化學發光平臺相比具有出色的相關性。
選取(qu)接(jie)近(jin)線性下限、低、高濃度校準品的(de)校準品進行(xing)測試，測試10次(ci)，結(jie)果(guo)表明(ming)10次(ci)測試結(jie)果(guo)一(yi)致，測試結(jie)果(guo)CV較(jiao)小，multi-LOCI技術的(de)精密(mi)度好。
PCT/IL-6項目組合的檢測性能
PCT/IL-6雙指(zhi)標重(zhong)組(zu)抗原(yuan)標準曲線(xian)(xian)結(jie)果顯示，PCT/IL-6聯檢沒有(you)表現出交叉反應，且PCT和IL-6指(zhi)標的(de)檢測(ce)靈敏度分別為6.28 pg/mL以及2.15 pg/mL，檢測(ce)性能好，檢測(ce)線(xian)(xian)性范圍約5個數(shu)量(liang)級(ji)。
Multi-LOCI在POCT多聯檢應用中的展望
此(ci)外，Multi-LOCI懸(xuan)具有快速、便(bian)捷、低(di)成本、高(gao)靈敏的(de)(de)特點。結(jie)合小型化成像(xiang)設備，以及微流控芯(xin)片/單人份試(shi)劑卡槽等裝置，可形成一套(tao)基于POCT的(de)(de)多聯(lian)檢系統（如下圖），有望解決目前的(de)(de)POCT產品性(xing)能低(di)、無法實(shi)現高(gao)性(xing)能且中(zhong)大panel多聯(lian)檢的(de)(de)問題。
綜(zong)上(shang)所述，Multi-LOCI是新一(yi)(yi)代的(de)(de)(de)免洗多重檢測(ce)技(ji)術，其(qi)反(fan)應操(cao)作步(bu)驟(zou)簡(jian)單(dan)，無需繁瑣的(de)(de)(de)洗滌，便可(ke)實現快速、準確、多重的(de)(de)(de)檢測(ce)。一(yi)(yi)方(fang)(fang)面可(ke)作為中心實驗室(shi)高(gao)通量、多聯(lian)檢方(fang)(fang)案(an)，另一(yi)(yi)方(fang)(fang)面可(ke)進一(yi)(yi)步(bu)發揮其(qi)方(fang)(fang)便快捷(jie)、設備簡(jian)單(dan)的(de)(de)(de)優(you)勢，形(xing)成POCT多聯(lian)檢系(xi)統(tong)。針對以上(shang)兩(liang)個(ge)方(fang)(fang)面的(de)(de)(de)應用(yong)場(chang)景，羧菲(fei)生物可(ke)為終端合作企(qi)業(ye)提供一(yi)(yi)體化、私人訂制的(de)(de)(de)multi-LOCI原材料和(he)應用(yong)解決(jue)方(fang)(fang)案(an)，同(tong)時也提供科研檢測(ce)服務。歡迎(ying)有需求的(de)(de)(de)企(qi)業(ye)和(he)個(ge)人聯(lian)系(xi)羧菲(fei)。
[1] Beaudet L., Rodriguez-Suarez R., Venne M.-H., et al. AlphaLISA immunoassays: The no-wash alternative to ELISAs for research and drug discovery [J]. Nature Methods, 2008, 5(12): an8-an9.
[2] Roby P., Bosse R., Arcand M. et al. Multiplex assay methods and compositions [P]. EP: EP2398868, 2011-12-28.
[3] Guo, Q., Wang, Y., Chen, C., et.al., Multiplexed Luminescence Oxygen Channeling Immunoassay Based on Dual-Functional Barcodes with a Host–Guest Structure: A Facile and Robust Suspension Array Platform. Small 2020, 16, 1907521. //doi.org/10.1002/smll.201907521.
[4] Zuying Feng, Qingsheng Guo*, Yao Wang, et.al., Evolution of “On-Barcode” Luminescence Oxygen Channeling Immunoassay by Exploring the Barcode Structure and the Assay System. ACS Omega 2022, 7, 2, 2344–2355. DOI:10.1021/acsomega.1c06236.